CYTOGENETYKA

GENOS to szeroki wybór produktów, wśród których znajdziecie odczynniki, naczynia, sprzęt i inne akcesoria wykorzystywane we wszelkiego rodzaju badaniach laboratoryjnych, między innymi z zakresu hodowli komórek. W tej kategorii naszego sklepu internetowego znaleźć można artykuły związane z niezwykle wymagającą dziedziną, jaką jest cytogenetyka. Proponujemy produkty do hodowli amniocytów, limfocytów i komórek szpiku.

Kompletne podłoża zapewniają optymalne warunki do wzrostu komórek, upraszczając proces przygotowywania pożywki, zapewniając powtarzalność i obniżając ryzyko kontaminacji. Nasz sklep pozwala na zaopatrzenie się w podłoża do hodowli, jak również w dodatkowe roztwory niezbędne do przeprowadzenia tego procesu, jak kolcemid, fitohemaglutynina czy trypsyna.

Cytogenetyka to jednak nie tylko roztwory i płyny, ale również różnego rodzaju naczynia hodowlane. Sklep GENOS proponuje butelki, szalki i probówki do hodowli komórkowych, w tym innowacyjne probówki hodowlane ze skosem rekomendowane do hodowli limfocytów. Do probówek warto dobrać specjalne statywy, pozwalające zaoszczędzić miejsce w inkubatorach. Dzięki bogatej ofercie naszego sklepu, każde laboratorium będzie odpowiednio wyposażone - zapraszamy!

Roztwory do cytogenetyki

W cytogenetyce klasycznej i molekularnej stosuje się różnorodne roztwory, które są kluczowe dla przeprowadzania analizy kariotypu i wykrywania aberracji chromosomowych. Badanie kariotypu ma na celu analizę liczby i struktury chromosomów w komórkach organizmu. co pozwala na wykrycie m.in. translokacji, inwersji oraz innych wad genetycznych, które mogą być przyczyną niepłodności i innych schorzeń.

Roztwory do hodowli komórek

1. Podłoża hodowlane:

   • Kompletne podłoże do hodowli limfocytów LymphoPrime - Gotowe do użycia podłoże do hodowli limfocytów oparte o podłoże klasyczne RPMI 1640, z dodatkiem surowicy płodowej cielęcej (FBS), mitogenu PHA i antybiotyków.
   • Kompletne podłoże do hodowli amniocytów AmnioPrime: Gotowe do użycia podłoże do hodowli amniocytów, uzyskiwanych z płynu owodniowego, oparte o podłoże klasyczne MEM Alpha, wzbogacone surowicą, antybiotykiem (gentamycyna 50µg/ml) i L-glutaminą.
   • Kompletne podłoże do hodowli komórek szpiku kostnego MarrowPrime: Gotowe do użycia podłoże do hodowli szpiku kostnego oparte o MEM Alpha Modification uzupełnionej L-Gutaminą, płodową surowicą bydlęcą FBS, antybiotykami (gentamycyna), hormonami i czynnikami wzrostu 

2. Roztwory do zatrzymania podziału komórkowego:

   • Kolcemid: Zatrzymuje komórki w metafazie, co ułatwia analizę chromosomów.

3. Roztwory hipotoniczne:

   • Chlorek potasu KCl (0,075 M),
   • Cytrynian sodu 0,8% - Hipotoniczny roztwór cytrynianu sodu stosowany samodzielnie lub z dodatkiem KCl potęguje przepuszczalność błony komórkowej i rozrywanie komórek na skutek szoku hipotonicznego zarówno w temperaturze pokojowej (15-30°C), jak i w 37°C.

4. PBS (Phosphate Buffered Saline):

   • Bufor fosforanowy do przepłukiwania i przygotowania komórek przed analizą.

5. Trypsyna:

   • Enzym używany do odklejania komórek od powierzchni naczyń hodowlanych przed barwieniem chromosomów.

Naczynia hodowlane w cytogenetyce

W cytogenetyce, zarówno klasycznej, jak i molekularnej, kluczową rolę odgrywają naczynia hodowlane, które umożliwiają hodowlę komórek niezbędnych do analizy kariotypu. Badanie kariotypu ma na celu analizę liczby i struktury chromosomów w komórkach organizmu, co pozwala na wykrycie aberracji chromosomowych, które mogą być przyczyną niepłodności, wad genetycznych oraz innych schorzeń.

Typy naczyń hodowlanych stosowanych w cytogenetyce

1. Szalki Petriego:

   • Używane do hodowli komórek uzyskiwanych z różnych tkanek, takich jak amniocyty z płynu owodniowego. Szalki Petriego są podstawowymi naczyniami, w których przeprowadzane są klasyczne badania cytogenetyczne.

2. Probówki hodowlane:

   • Wykorzystywane do hodowli limfocytów. Główna ich zaletą jest możliwość prowadzenia większej ilości badań w  mniejszych objętościach. Odpowiednie probówki o ściętych powierzchniach ze skosem są połączeniem butelki hodowlanej z falkonem, pozwalając na prowadzenie hodowli a następnie wirowanie materiału w tej samej probówce.

3. Butelki hodowlane:

   • Stosowane do hodowli komórek adherentnych, takich jak fibroblasty, które są przyklejone do powierzchni butelki a także zawiesinowych jak np. limfocyty. 

Jak używa się roztworów do badań cytogenetycznych

Roztwory używane w cytogenetyce są kluczowe dla prawidłowego przygotowania i analizy chromosomów. Badania cytogenetyczne, takie jak analiza kariotypu, pozwalają na wykrycie aberracji chromosomowych, które mogą być przyczyną niepłodności, wad genetycznych oraz innych schorzeń.

Na czym polega badanie? Główne etapy badań cytogenetycznych

1. Pobranie próbek:

   • Próbki komórek / materiał genetyczny mogą pochodzić z różnych źródeł, takich jak krew obwodowa, płyn owodniowy, tkanki płodowe, szpik kostny czy komórki nowotworowe.

2. Hodowla komórek:

   • Komórki są hodowane w odpowiednich roztworach hodowlanych. Dostępne kompletne płyny hodowlane zapewniają bezpieczne i powtarzalne warunki hodowli. Przykłady podłoży hodowlanych to LymphoPrime do hodowli limfocytów czy AmnioPrime do hodowli amniocytów z płynu owodniowego.
   • Podłoża hodowlane zapewniają odpowiednie warunki wzrostu, takie jak pH, składniki odżywcze i czynniki wzrostu, które są niezbędne dla proliferacji komórek.

3. Zatrzymanie podziału komórkowego:

   • Kolchicyna lub demekolcyna są dodawane do hodowli komórek, aby zatrzymać komórki w metafazie, co jest kluczowe dla analizy chromosomów. Kolchicyna i kolcemid hamują tworzenie wrzeciona kariokinetycznego, zatrzymując komórki w fazie metafazy.

4. Roztwory hipotoniczne:

   • Po zatrzymaniu podziału komórkowego, komórki są inkubowane w roztworze hipotonicznym, takim jak 0,075 M KCl lub cytrynian sodu. Roztwory te powodują pęcznienie komórek i rozdzielenie chromosomów, co ułatwia ich późniejszą analizę.

5. Utrwalenie komórek:

   • Komórki są utrwalane w roztworze utrwalającym, najczęściej mieszaninie metanolu i kwasu octowego w stosunku 3:1. Utrwalenie stabilizuje struktury komórkowe i chromosomy, przygotowując je do barwienia i analizy.

6. Barwienie chromosomów:

   • Chromosomy są barwione przy użyciu różnych technik barwienia, ale w głównej mierze oparta jest na metodzie barwienia Giemsy, co pozwala na uzyskanie charakterystycznych wzorów prążków. Barwienie to jest kluczowe dla analizy kariotypu, pozwalając na wykrycie aberracji chromosomowych. 

7. Analiza chromosomów:

   • Barwione preparaty są analizowane pod mikroskopem aby można było przeprowadzić analizę i badanie prawidłowości chromosomów. Badanie kariotypu ma na celu ocenę liczby i struktury zestawu chromosomów, identyfikację aberracji strukturalnych (np. translokacji, inwersji) oraz wykrycie liczbowych aberracji chromosomowych, takich jak obecność dodatkowego chromosomu (np. w zespole Downa).

8. Zaawansowane techniki molekularne - cytogenetyka molekularna wykorzystuje sondy molekularne.

   Często oparta jest na metodzie fluorescencyjnej i wykorzystuje różne metody biologii molekularnej:

   • Fluorescencyjna hybrydyzacja in situ (FISH- fluorescent in situ): Badanie FISH jest oparte na metodzie fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ i wykorzystuje sondy fluorescencyjne do wykrywania specyficznych sekwencji DNA na chromosomach. FISH pozwala na dokładną lokalizację aberracji chromosomowych, w tym translokacji i inwersji. Sondy wykrywają określone sekwencje DNA. Główną ich zaletą jest możliwość wykrywania aberracji w jądrach komórkowych, bez konieczności hodowli komórkowej in vitro.
   • Porównawcza hybrydyzacja do mikromacierzy (aCGH): Ta metoda umożliwia analizę całego genomu, wykrywając subtelne zmiany liczby i struktury chromosomów z wykorzystaniem mikromacierzy, dzięki czemu możliwa jest analiza zmian, które mogą być niewidoczne przy klasycznej analizie kariotypu.

Wynik badania cytogenetycznego

Wynik badania cytogenetycznego dostarcza informacji o prawidłowości struktury i liczby chromosomów obecnych w naszych komórkach, w tym chromosomów płci. Analiza kariotypu pozwala na wykrycie nieprawidłowości chromosomowych: mutacji oraz aberracji chromosomowych, które są przyczyną różnych problemów zdrowotnych, m.in. niepłodności i wad genetycznych. Aberracje strukturalne polegają na zmianie struktury chromosomu. Mogą zaobserwować odwrócenie fragmentu chromosomu o 180 stopni (inwersje), powielenie części chromosomu (duplikacje), utratę fragmentu chromosomu (delecje),  przeniesienie fragmentu jednego z chromosomów na chromosom z innej pary (translokacje), a także inne zmiany w budowie, które są widoczne w mikroskopie.

Badanie kariotypu jest często wykonywaną metodą badania przeprowadzanego za pomocą metod cytogenetyki klasycznej. Jakie schorzenia możemy wykryć przy pomocy tego badania? Kariotyp to zestaw chromosomów. Prawidłowy kariotyp człowieka tworzą 22 pary autosomów (chromosomów autosomalnych) oraz 1 para chromosomów płci – allosomów. Prawidłowy kariotyp mężczyzny to 46, XY, a kobiety 46, XX. Chromosomy XY determinują płeć męską, a XX – żeńską. Wskazaniem do wykonania badania kariotypu może być podejrzenie wad genetycznych, nawracające poronienia, problemy z płodnością oraz diagnostyka prenatalna płodu. Wynik badania cytogenetycznego może dostarczyć cennych informacji diagnostycznych, pomagając w zrozumieniu genetycznych przyczyn problemów zdrowotnych oraz w planowaniu odpowiednich strategii leczenia i wsparcia pacjentów. Wynik badania kariotypu może również pomóc w diagnostyce nowotworów oraz innych chorób genetycznych.